Kromasil 色谱柱的使用与维护
色谱柱安装与平衡
使用经过滤并脱气的流动相( 不含任何缓冲液) 彻底冲洗HPLC 泵和管线,确保系统中没有气泡。按照流向标签( 位于色谱柱上) 指示的方向将色谱柱一端连接至进样器,另一端不接检测器。将泵流速设置为0.1 mL/min( 或系统允许最低设置) 并在5 分钟内增大至正常流速。
当色谱柱出口处有溶剂自由流出时停止泵送,擦拭出口端并将其连接到检测器。
以正常流速和约10-30 倍色谱柱体积的流动相来平衡色谱柱。
检测柱效
强烈建议用户在收到Kromasil 原装进口色谱柱15 天内进行柱效检测,并在整个使用周期内,
进行定期的柱效测试,以便随时监测色谱柱的寿命情况。
运行参数
5 μm 及3.5 μm 色谱柱最大耐受压力400
Bar,2.5 μm 及1.8 μm 色谱柱最大耐受压力1000 bar。最高工作温度不高于60 ℃。在使用Kromasil Classic 系列C18,C8,C4,Phenyl
色谱柱时,流动相pH 控制在1.5-9.5 之间,这样有利于延长色谱柱的使用寿命。
流动相的配置
仅使用HPLC 色谱纯溶剂、水、最高纯度的化学品和试剂。
使用前对所有流动相进行过滤和脱气。
确保溶剂可互溶。
色谱柱的保存
色谱柱使用完毕后,应尽可能地冲洗掉残留在色谱柱内的杂质和沉积物。保存在适合的储存溶剂中,储存溶剂可以参考COA 中建议使用溶剂。储存环境需保持温度稳定、避光,并注意检查Peek堵头,防止松动导致柱内溶剂流失。
色谱柱的清洗
柱压升高,保留时间变化和柱效降低都是色谱柱被污染的表现。
多数情况下,通过正确的冲洗能够解决上述问题。我们需要谨记的是越早冲洗或再生越会更容易的解决上述问题。
通常具有较强吸附的杂质都集中在色谱柱进口一端,最简单的方法是对色谱柱进行反冲。反冲的方法只对填装紧密的色谱柱有效,柱性能也不会发生变化。
反冲时,请按照下述的一般步骤,使用特定溶剂对色谱柱进行清洗,并根据不同厂商的建议进行,以免损坏色谱柱。
反相柱(C18, C18(w), C8,C4,C1,
Phenyl,
PhenylHexyl)
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未键合的硅胶柱(SIL)
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使用10 倍柱体积的如下溶剂依次清洗
a. 水: 乙腈=95:5
b. 四氢呋喃
c. 乙腈: 水=95:5
d. 不含盐的流动相
e. 流动相
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使用10 倍柱体积的如下溶剂依次清洗
a. 异丙醇
b. 甲醇
c. 乙酸乙酯
d. 流动相
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键合正相柱(CN, Diol)
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用于蛋白/ 多肽分析的反相柱(C18,
C18(w),
C8,C4,C1, Phenyl, PhenylHexyl)
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使用10 倍柱体积的如下溶剂依次清洗
a. 三氯甲烷
b. 异丙醇
c. 二氯甲烷
d. 流动相
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a. 使用20 倍柱体积的不含盐流动相进行清洗
b. 梯度清洗
流动相A: 0.1%TFA 水溶液 : 乙腈=95 : 5流动相B: 0.1%TFA 乙腈: 异丙醇=1 : 2
在30 min 内,B 相从25% 升至100% 进行清洗,运行2 个梯度程序。
c. 流动相平衡,切勿将色谱柱保存在TFA 中
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反冲时,请将流动相流速将至正常流速的1/10-1/5, 并断开检测器。反冲时,请将流动相流速将至正常流速的1/10-1/5, 并断开检测器。
Kromasil 保护柱
色谱柱一旦污染,冲洗过程将非常耗时,建议使用保护柱减少对色谱柱的污染,
Kromasil 保护柱 :
• 与Kromasil 色谱柱具有相同的填料,最佳保护色谱柱,同时不影响分析结果。
• 柱芯柱套式设计,成本低。
部分常规保护柱订货信息
货号
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描述
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00000HHO
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2.1-4.6 mm guard holder
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00000KCO
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2.1-21.2 mm guard coupler
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M05CLNGC
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Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)
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M05CLNSK
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Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard starter kit
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M05CMNGC
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Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)
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M05CMNSK
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Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard starter kit
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M05CSNGC
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Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)
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M05CSNSK
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Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard starter kit
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M05NHNGC
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Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)
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M05NHNSK
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Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard starter kit
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M05PHNGC
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Kromasil 100 -5 -Phenyl 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)
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M05PHNSK
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Kromasil 100-5 -Phenyl 3.0-4.6mm guard starter kit
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S05CNNGC
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Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)
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S05CNNSK
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Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mmguard starter kit
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M05SINGC
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Kromasil 100-5 -SIL 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)
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M05SINSK
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Kromasil 100 -5 -SIL 3.0-4.6 mm guard starter kit
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S05DINGC
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Kromasil 60-5 - Diol 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)
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S05DINSK
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Kromasil 60 -5 -Diol 3.0-4.6 mm guard starter kit
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